EPH-3-DBS在肿瘤组织选择性富集，而非靶向DBS无明显肿瘤亲和力

根治性手术切除是早期结直肠癌治疗的基石，但术中精准肿瘤定位仍是临床挑战。靶向荧光探针作为辅助术中实时肿瘤显像的有效工具应运而生。EPH-3-DBS是一种靶向EphA2的近红外一区/二区双模态荧光分子探针，由新型花菁染料DBS与高亲和力EphA2靶向肽EPH-3构成。该探针不仅具备优异的光学特性，更能特异性结合EphA2阳性肿瘤。体内成像显示EPH-3-DBS在肿瘤组织选择性富集，而非靶向DBS无明显肿瘤亲和力。在原位结直肠癌模型和肝转移模型中均观察到卓越的显像效果。凭借高肿瘤背景比（TBR>2.0）和持久成像窗口，EPH-3-DBS在荧光导航手术领域展现出重要应用潜力。

促红细胞生成素产生型肝细胞受体A2（EphA2）是公认的致癌驱动因子，在结直肠癌等多种恶性肿瘤中呈现过表达现象。作为调控肿瘤进展、血管生成和转移的关键分子，其肿瘤特异性表达模式使其成为癌症成像与治疗领域极具吸引力的分子靶点。尽管已有多种EphA2成像剂问世，但其在近红外II（NIR-II）波段的应用仍鲜有探索。相较于短波长发射光谱，NIR-II成像技术能显著降低组织自发荧光、光子吸收与散射，从而获得更优的信噪比和更高空间分辨率。在该领域具有开创性的研究中，胡团队发现吲哚菁绿（ICG）在NIR-II波段存在扩展发射尾，这一发现为NIR-II成像技术提供了极具临床转化潜力的创新策略。

基于ICG等菁染料的结构框架，通过不对称设计开发出新型水溶性近红外I/II荧光染料DBS，其性能较ICG更胜一筹。DBS展现出优异的水溶性（log p=-2.4），其紫外-可见吸收光谱在不同溶液中进行测量，荧光发射光谱则在PBS溶液中测定。DBS在PBS溶液中呈现两个主要吸收峰，分别位于722 nm和800 nm。当激发波长为808 nm时，其最大荧光发射波长在图1(b)中观测到930 nm。与EPH-3偶联后，DBS的最大吸收和发射波长均未发生显著变化。这些结果表明，相较于ICG，DBS具有更长的吸收波长和更高的荧光强度（ΦF=0.12），且在NIR-II区域呈现长发射尾，使其成为生物成像应用的理想选择。此外，EPH-3的偶联并未影响DBS的光学特性。

据先前报道的高亲和力EphA2靶向肽EPH-3 (Tyr-HYP-Thr-[d]-Ser-Glu-HYP，解离常数Kd=13.1 nM）与DBS偶联形成EPH-3-DBS。通过HCT116细胞系测试了EPH-3-DBS的亲和力，并在荷瘤小鼠模型中验证了其肿瘤靶向能力。此外，研究人员在原位结肠癌模型和肝转移模型中进行了荧光成像实验，结果显示EPH-3-DBS能成功区分肿瘤组织与正常组织。

单字母 H2N-Y-Hyp-TsE-Hyp-CONH2
多字母 H2N-Tyr-Hyp-Thr-DSer-Glu-Hyp-CONH2
氨基酸个数 6
分子式 C31H45N7O13
平均分子量(MW) 723.73

EphA2在HCT116细胞中呈现过表达现象，因此研究人员选择该细胞系进行细胞成像实验。图3(a)显示，eph-3-dbs与细胞的最佳孵育时间为30分钟。图3(b)中，DBS在HCT116细胞中的染色效果欠佳，这可能与其良好的水溶性及缺乏肿瘤细胞特异性靶向性有关。相比之下，EPH-3-DBS在HCT116细胞中展现出强烈的荧光信号，主要定位于细胞膜表面。而对照组的荧光信号较弱，表明EPH-3-DBS能够特异性结合HCT116细胞膜表面的EphA2受体。

EPH-3-DBS不仅能特异性靶向小鼠皮下肿瘤，还能精准定位原位肿瘤和转移性肿瘤。该技术凭借其卓越的微小肿瘤识别能力与良好的生物分布特性，为手术过程中肿瘤的早期定位提供了有力工具。

参考文献：doi.org/10.1016/j.talanta.2025.129044