本文建立了一种筛选阿达木单抗(adalimumab, ADM) 特异性结合肽的噬菌体展示方法, 为ADM的临床研究提供特异性识别元件, 并基于该多肽成功建立用于临床检测ADM的间接酶联免疫吸附分析方法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay, i-ELISA)。以ADM为靶分子, 利用M13噬菌体线性十二肽库展示技术, 进行五轮多肽淘选。通过对每一轮洗脱液的滴度进行测定发现, 回收率从7.28×10-6提高到1.55×10-3, 表明洗脱液中与ADM结合的多肽在不断富集, 且富集效果较好; 

对第五轮筛选扩增液进行测序, 结果发现有5条多肽序列出现频次较高, 被认为是潜在能够与ADM特异性结合的多肽, 并进行固相合成; 分别通过表面等离子体共振技术(surface plasmon resonance, SPR) 和ELISA实验验证并鉴定了5条多肽序列与ADM的特异性结合能力, 结果表明第一条多肽序列(Pep1) 和第二条多肽序列(Pep2) 与ADM呈现特异性结合, 亲和力常数(KD) 分别为7.91×10-5和1.67×10-5 mol·L-1, 而其中Pep1与ADM同型抗体人免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG) 的亲和力常数为1.35×10-4 mol·L-1, 比与ADM的亲和力常数低1个数量级, 由此可判定Pep1为ADM的特异性结合肽。

名称：Pep1

单字母 H2N-RPSTTPRVHHIR-OH

多字母 H2N-Arg-Pro-Ser-Thr-Thr-Pro-Arg-Val-His-His-Ile-Arg-OH

氨基酸个数 12

分子式 C62H105N25O16

平均分子量(MW) 1456.66

基于Pep1成功建立了抗体药物ADM间接ELISA分析方法。随着ADM浓度的不断增加OD450值呈规律性变化, 该方法可用于临床ADM血药浓度的监测。本研究获得能够与ADM特异性结合的多肽, 该多肽序列可作为ADM的特异性识别元件, 不仅实现ADM的血药浓度监测, 也可为ADM体内外精确定性定量提供了有效工具, 同时为其他单克隆抗体药物识别元件的发现提供了新的策略和思路。

参考文献：DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0861